一、概念

1. 细胞系（Cell Line）：指经过首次传代成功后，由原代培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）组成的细胞群体。

2. 细胞株（Cell Strain）：通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志物的细胞。细胞株的特征必须在整个培养过程中始终存在。如果传代数量有限，则称为有限细胞株（finite cell strain）；如果能够无限传代，则称为连续细胞株（continuous cell strain）。对于人类肿瘤细胞，若在体外培养超过半年，且生长稳固且可持续传代，则可认定为连续性株或系。

二、建立细胞系（或株）的要求

体外培养群体的认可标准因具体情况而异，并无统一规范。对于原代培养的细胞，需确保供体均一且取材部位与组织种类的稳定性。例如，若用于长期培养并需重复传代，通常需提供以下信息：

1. 组织来源：需说明细胞供体所属物种、性别、年龄及取材的器官或组织。如为肿瘤组织，还需提供临床及病理诊断信息，以及病历号等。

2. 细胞生物学检测：了解细胞的基本及特殊生物学特性，如形态、特异结构、生长曲线、分裂指数、倍增时间和接种率等。对于肿瘤细胞，需进行软琼脂培养、异体接种及正常组织侵润实验，以确认其恶性来源。

3. 培养条件和方法：需详述细胞系（或株）适应的生存环境，包括所用培养基、血清种类、使用量及适宜的pH值。

三、细胞建株的要点及基本过程

(一) 肿瘤细胞培养技术要点

1. 取材：材料主要来源于外科手术或活检，需避免使用坏死组织，尽量从瘤细胞集中且活力良好的部位取材。可将瘤性转移淋巴结或胸腹水作为理想培养材料。取材后应尽快进行培养，如因故延迟可进行冻存，方法同正常组织。

2. 成纤维细胞排除：肿瘤组织中常夹杂成纤维细胞，这些细胞会与肿瘤细胞一起生长，可能导致肿瘤细胞的生长受阻。因此需仔细排除成纤维细胞，常用方法包括机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法和胶原酶消化法等。

3. 提高肿瘤细胞培养存活率和生长率：根据实验经验，肿瘤细胞在体外培养较为困难，因此建立可传代的细胞系更为复杂。肿瘤细胞经原代培养后需适应新的环境，使其能够生长。通常需采取一些特殊措施，例如使用合适底物（如鼠尾胶原底层）和细胞生长因子（如胰岛素、氢化可的松、雌激素等），或者考虑动物媒介培养。

(二) 人类淋巴母细胞建株方法

1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血和2ml RPMI 1640，混匀后沿管壁缓慢加到预置的淋巴细胞分离液上，静置30分钟。

2. 以1500rpm离心15分钟，吸取白细胞层（第二层）至另一个离心管中。

3. 添加5ml RPMI 1640洗涤白细胞两次。

4. 将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl的EB病毒液，充分混匀。

5. 水浴摇床搅拌，设置为40次/分钟，37℃培养3小时。

6. 再次以1500rpm离心15分钟，将细胞接种至1ml含谷氨酰胺的培养基中，加入10μl环胞霉素，轻轻混匀，继续在37℃培养。

7. 观察细胞转化和生长情况，通常在5天内决定是否进行半量换液，换液一般为1-2次，并维持环胞霉素浓度。

8. 待转化细胞数量显著增加并出现团块后，可转入25ml细胞培养瓶中，加1-2ml培养基，在37℃下培养10-15天，一般每隔3-4天观察并决定换液和传代的时机。

9. 当细胞生长达到一定数量后，应进行冻存，冻存前需进行核型分析并存档，以保证细胞株的稳定性。

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